Ακαθαρσίες Τιρζεπατίδης

Ακαθαρσίες Τιρζεπατίδης|Έλεγχος ακαθαρσίας τιλπεπτιδίου|Προσαρμοσμένη σύνθεση και επιβεβαίωση δομής ακαθαρσιών|Επιστήμη-Πεπτίδιο

Έλεγχος ακαθαρσιών τιρζεπατίδης - για GLP-1/GIP διπλός-στόχος έρευνας ποιότητας φαρμάκων, αναφορά φαρμάκων γενικής χρήσης. Η επιστήμη-Το πεπτίδιο παρέχει προσαρμοσμένη σύνθεση ακαθαρσιών που σχετίζονται με τιλπεπτίδιο, συμπεριλαμβανομένων πεπτιδίων διαγραφής, οξειδωμένων ακαθαρσιών, υποστήριξης λιπαρών οξέων, προϊόντων επιβεβαίωσης διμερών, κ.λπ. σας Μπορούμε να υποστηρίξουμε τη μελέτη φασματοσκοπίας ακαθαρσιών σας με δεδομένα δομικής επιβεβαίωσης. Καλώς ήρθατε να επικοινωνήσετε μαζί μας.

Το Tirzepatide (Tirzepatide) είναι ο διπλός αγωνιστής GLP-1/GIP με τον οποίο ανακάλυψε η Eli Lilly, και βρίσκεται σε πλήρη εξέλιξη αυτά τα δύο χρόνια. Έχει καλή επίδραση στη μείωση του σακχάρου και ισχυρή επίδραση στη μείωση του βάρους, και ονομάζεται η αναβαθμισμένη έκδοση του «θαυματουργού φαρμάκου για απώλεια βάρους». Οι εγχώριοι κατασκευαστές πεπτιδικών γενόσημων φαρμάκων, πολλοί το κοιτούν επίμονα - μετά τη λήξη του διπλώματος ευρεσιτεχνίας, ποιοι μπορούν πρώτα να περάσουν από την ποιότητα της έρευνας, ποιος θα έχει την ευκαιρία να αρπάξει το πρώτο γενόσημο.

 

Ωστόσο, η ποιότητα του τιλπεπτιδίου δεν είναι τόσο εύκολο να μελετηθεί. Είναι πιο πολύπλοκο από τη σιμεθικόνη, με 39 αμινοξέα, μια πλευρική αλυσίδα λιπαρών οξέων (εικοσανοδιοϊκό οξύ) και έναν συνδέτη. Οι ακαθαρσίες που μπορεί να εμφανιστούν κατά τη διαδικασία σύνθεσης είναι πολύ υψηλότερες από αυτές των συνηθισμένων πεπτιδίων. Τα πεπτίδια που λείπουν, οι οξειδωτικές ακαθαρσίες, τα προϊόντα αποβολής λιπαρών οξέων, τα διμερή, οι ακαθαρσίες που σχετίζονται με τους συνδέτες-πρέπει το καθένα να έχει έναν έλεγχο, το καθένα πρέπει να είναι καθαρό.

 

Έχουμε συσσωρεύσει μεγάλη εμπειρία στη σύνθεση σύνθετων ακαθαρσιών πεπτιδίων. Έχουμε εξειδικευτεί στη μελέτη του τιλπεπτιδίου και γνωρίζουμε ποιες είναι οι δυσκολίες στο προφίλ ακαθαρσίας του και ποια είναι τα βασικά στοιχεία ελέγχου. Μπορούμε να προσαρμόσουμε τη σύνθεση διαφόρων ελέγχων ακαθαρσίας τιλπεπτιδίου σύμφωνα με τις ανάγκες σας, με δεδομένα επιβεβαίωσης δομής και να σας βοηθήσουμε να καθορίσετε τη μέθοδο έτσι ώστε να είναι λιγότερο πιθανό να σας χορηγηθεί συμπλήρωμα κατά την κατάθεση.

Η μοριακή δομή του τιλπεπτιδίου καθορίζει ότι το προφίλ ακαθαρσίας του είναι πολύ πιο περίπλοκο από αυτό των γενικών πεπτιδίων. Όταν κάνουμε μελέτες ακαθαρσιών, εστιάζουμε κυρίως σε αυτές τις κατηγορίες:

Λείπει πεπτίδιο
Τα 39 αμινοξέα, οποιοδήποτε από τα οποία παραλείπεται κατά τη διαδικασία σύνθεσης, είναι ακαθαρσία. Οι χρόνοι κατακράτησης των πεπτιδίων που λείπουν στην HPLC ήταν ευρέως κατανεμημένοι, με διαφορετική πολικότητα των πεπτιδίων που λείπουν σε διαφορετικές θέσεις. Μερικά λείπουν στο Ν-τελικό άκρο, άλλα στη μέση και μερικά κοντά στο σημείο προσκόλλησης λιπαρών οξέων. Λάβαμε μια παραγγελία από έναν πελάτη για 15 πεπτίδια που λείπουν σε διαφορετικές θέσεις για να εντοπίσουμε όλες τις πιθανές ακαθαρσίες που λείπουν στη διαδικασία τους.

Οξειδωτικές ακαθαρσίες
Το Met στην αλληλουχία του τιλπεπτιδίου είναι ευαίσθητο σε οξείδωση σε σουλφοξείδιο και στη συνέχεια σε σουλφόνη. Οι οξειδωμένες ακαθαρσίες εμφανίζονται συχνά σε μελέτες σταθερότητας και αναπτύσσονται μετά από κάποιο χρονικό διάστημα. Κάναμε μια σύγκριση, κάτω από επιταχυνόμενες συνθήκες για ένα μήνα, η κορυφή της οξείδωσης μπορεί να αυξηθεί σε περισσότερο από 0,3%, χωρίς έλεγχο.

Προϊόντα αποβολής λιπαρών οξέων
Αυτή είναι μια ακαθαρσία μοναδική για το τιλπεπτίδιο. Η πλευρική αλυσίδα του λιπαρού οξέος (εικοσανοδιοϊκό οξύ) συνδέεται με τη λυσίνη μέσω ενός συνδετήρα και αυτή η τροποποίηση μπορεί να αποβληθεί εν μέρει κατά τη σύνθεση ή την αποθήκευση, με αποτέλεσμα το λιπαρό οξύ-να αφαιρεί ακαθαρσίες. Πιο προβληματικά, η αποβολή μπορεί να συμβεί σε διαφορετικές θέσεις - μεταξύ του λιπαρού οξέος και του συνδέτη ή μεταξύ του συνδέτη και του πεπτιδίου - με αποτέλεσμα διαφορετικές ακαθαρσίες. Έχουμε συνθέσει αρκετές ακαθαρσίες που σχετίζονται με τα λιπαρά οξέα-για τους πελάτες μας, που κυμαίνονται από την πλήρη αποβολή έως ένα μικρό τμήμα.

Διμερή/πολυμερή
Δύο ή περισσότερα μόρια τιλπεπτιδίου συγκεντρώνονται για να σχηματίσουν ένα διμερές ή μεγαλύτερο. Το μοριακό βάρος του διμερούς είναι διπλάσιο από αυτό της κύριας κορυφής και είναι συχνά μια ευρεία κορυφή στην HPLC, επομένως πρέπει να διαχωριστεί και να καθαριστεί ειδικά για να μπορέσει να χρησιμοποιηθεί ως έλεγχος. Έχουμε κάνει την προετοιμασία των διμερών και χρειάστηκαν αρκετοί γύροι καθαρισμού για να επιτευχθεί καθαρότητα μεγαλύτερη από 95%.

Ακαθαρσίες που σχετίζονται με το σύνδεσμο-
Η τροποποίηση λιπαρού οξέος του τιλπεπτιδίου χρησιμοποιεί έναν συνδέτη (π.χ., -Glu, PEG, κ.λπ.), και αυτός ο ίδιος ο συνδέτης μπορεί να προκαλέσει παρενέργειες κατά τη σύνθεση, δημιουργώντας ακαθαρσίες με ελλείποντα ή ατελή συνδετικά. Αυτό το είδος ακαθαρσίας δεν βρίσκεται σε κοινά πεπτίδια, αλλά είναι μοναδικό στο τιλπεπτίδιο, το οποίο πρέπει να μελετηθεί ειδικά.

Αποαμιδωμένες ακαθαρσίες
Η ασπαραγίνη (Asn) και η γλουταμίνη (Gln) αποαμιδιώνονται εύκολα υπό όξινες συνθήκες ή συνθήκες θέρμανσης, με αποτέλεσμα ισομερή. Υπάρχουν πολλά Asn και Gln στην αλληλουχία του τιλπεπτιδίου και η ακαθαρσία αποαμίδωσης εμφανίζεται συχνά στη δοκιμή εξαναγκασμένης αποδόμησης, επομένως το προϊόν ελέγχου πρέπει να χρησιμοποιηθεί για τον εντοπισμό της ακαθαρσίας.

Διαστερεοϊσομερή
Κατά τη διάρκεια της σύνθεσης μακράς αλυσίδας, μεμονωμένα αμινοξέα μπορεί να υποστούν ρακεμοποίηση, με αποτέλεσμα διαστερεοϊσομερή. Η περιεκτικότητα αυτού του είδους ακαθαρσίας συνήθως δεν είναι υψηλή, αλλά οι ειδικοί θα ρωτήσουν κατά τη δήλωση και είναι καλύτερο να έχετε ένα προϊόν ελέγχου για επιβεβαίωση.

Πολλές από αυτές τις ακαθαρσίες δεν μπορούν να αγοραστούν και πρέπει να συντεθούν κατά παραγγελία. Έχουμε κάνει πολλά έργα για την προσαρμογή των ακαθαρσιών τιλπεπτιδίου, καλύπτοντας όλες τις παραπάνω κατηγορίες.

Η διαγραφή της σειράς πεπτιδίων
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95%, με επιβεβαίωση MS και NMR. Έχουμε συνθέσει ένα σύνολο πεπτιδίων με απόσταση 5 αμινοξέων από το Ν-τελικό έως το C-τελικό.

Οξειδωτικές ακαθαρσίες
Met in Tilpeptide is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control. The purity is >95% και μπορούμε να παρέχουμε το φάσμα LC-MS για επιβεβαίωση του βαθμού οξείδωσης. Το σουλφοξείδιο και η σουλφόνη διαχωρίζονται με HPLC και μπορούμε να κάνουμε και τα δύο.

Προϊόντα αποβολής λιπαρών οξέων
Αυτή είναι μια από τις πιο δύσκολες ακαθαρσίες στο τιλπεπτίδιο. Η αλυσίδα των λιπαρών οξέων μπορεί να είναι εντελώς κλειστή ή μπορεί να είναι μερικώς απενεργοποιημένη (π.χ. λείπουν οι τελευταίοι άνθρακες). Μπορούμε να συνθέσουμε μια σειρά παραλλαγών για διαφορετικές θέσεις της αλυσίδας. Σε ένα από τα πιο περίπλοκα έργα που έχουμε κάνει, ο πελάτης μας ζήτησε να συνθέσουμε μια ακαθαρσία με 8 άνθρακες που λείπουν από την αλυσίδα των λιπαρών οξέων και μας πήρε δύο μήνες για να το κάνουμε σωστά.

Dimer
Διμερή που σχηματίζονται με διασταυρούμενη-σύνδεση ή μη-ομοιοπολικές αλληλεπιδράσεις μπορούν να παρασκευαστούν με διαφορετικές μεθόδους και να απομονωθούν και να καθαριστούν για να παρέχουν ελέγχους υψηλής καθαρότητας. Τα διμερή είναι επίπονο για τον καθαρισμό, αλλά έχουμε την εμπειρία να γνωρίζουμε πώς να διαχωρίζουμε τα μονομερή.

Ακαθαρσίες που σχετίζονται με το σύνδεσμο-
Ο σύνδεσμος ( -Glu, PEG, κ.λπ.) μπορεί να λείπει ή να είναι ατελής, με αποτέλεσμα μια σειρά σχετικών ακαθαρσιών. Μπορούμε να συνθέσουμε διάφορες παραλλαγές με συνδετήρες που λείπουν, βραχείς συνδετήρες ή αταίριαστους συνδέτες και να σας βοηθήσουμε να δημιουργήσετε τα φάσματα τέτοιων ακαθαρσιών.

Αποαμιδωμένες ακαθαρσίες
Για τις θέσεις Asn και Gln στην αλληλουχία, μπορούμε να παρασκευάσουμε ελέγχους αποαμιδιωμένων ακαθαρσιών με εξαναγκασμένη αποικοδόμηση ή στοχευμένη σύνθεση. Η διαφορά στο μοριακό βάρος μετά την αποαμίδωση είναι μόνο 1, κάτι που δεν είναι εύκολο να διακριθεί από την MS, επομένως συνήθως χρησιμοποιούμε NMR ή ειδικές χρωματογραφικές συνθήκες για επιβεβαίωση.

Άλλες προσαρμοσμένες ακαθαρσίες
Εάν βρείτε μια νέα άγνωστη ακαθαρσία στην έρευνά σας, μπορούμε να σας βοηθήσουμε να αναλύσετε τη δομή και να τη συνθέσετε. Στείλτε μας τα δείγματα, θα κάνουμε ανάλυση LC-MS, θα συναγάγουμε τη δομή, στη συνέχεια θα κάνουμε κατευθυντική σύνθεση και, στη συνέχεια, θα συγκρίνουμε τον χρόνο διατήρησης και το φάσμα μάζας για να επιβεβαιώσουμε τη συμφωνία. Έχουμε κάνει αυτή τη διαδικασία πολλές φορές και το ποσοστό επιτυχίας είναι αρκετά υψηλό.

Ανάπτυξη και επικύρωση αναλυτικής μεθόδου
Κατά τη ρύθμιση μιας μεθόδου HPLC ή LC-MS, απαιτείται έλεγχος ακαθαρσιών για εντοπισμό, προσδιορισμό διαχωρισμού, επαλήθευση γραμμικού εύρους και ανάκτηση. Χωρίς τον έλεγχο, λείπει ένα κομμάτι από την επικύρωση της μεθόδου. Πολλοί πελάτες μας ζητούν να κάνουμε μερικές βασικές ακαθαρσίες πρώτα για να ρυθμίσουμε τη μέθοδο και μετά να αναπληρώσουμε σιγά σιγά τις υπόλοιπες.

Ετερογενής φασματομετρία μάζας
Όταν δηλώνεται ένα γενόσημο φάρμακο, απαιτείται ολοκληρωμένη ποιοτική και ποσοτική ανάλυση των προσμείξεων διεργασίας και των προϊόντων αποδόμησης. Η θέση, το περιεχόμενο και η δομή κάθε ακαθαρσίας πρέπει να επιβεβαιώνονται από ένα προϊόν ελέγχου. Είδαμε τη δήλωση των πληροφοριών που στάλθηκαν για να συμπληρώσετε, εννέα φορές στις δέκα είναι οι ακαθαρσίες αυτού του κομματιού δεν κατάλαβα.

Μελέτες σταθερότητας
Σε δοκιμές μακροπρόθεσμης σταθερότητας και επιταχυνόμενων δοκιμών, είναι απαραίτητο να καθοριστεί ποια προϊόντα υποβάθμισης είναι κυρίαρχα και ποια είναι η τάση στο περιεχόμενο. Με τον έλεγχο ακαθαρσιών, μπορούμε να ποσοτικοποιήσουμε και να παρακολουθήσουμε με ακρίβεια. Ένας πελάτης έκανε τη σταθερότητα της προετοιμασίας του τιλπεπτιδίου και διαπίστωσε ότι μια κορυφή αποικοδόμησης αναπτύχθηκε πολύ γρήγορα υπό επιταχυνόμενες συνθήκες, έτσι αναλύσαμε και συνθέσαμε από το MS για να επιβεβαιώσουμε τη δομή και, στη συνέχεια, ο πελάτης ανακουφίστηκε να το αναφέρει.

Δοκιμή απελευθέρωσης παρτίδας
Μετά την εμπορευματοποίηση, κάθε παρτίδα API ή σκεύασμα πρέπει να ελέγχεται για την εν λόγω ουσία. Οι έλεγχοι ακαθαρσιών είναι απαραίτητα εργαλεία για τη δοκιμή απελευθέρωσης.

Πληροφορίες για δηλώσεις γενόσημων φαρμάκων
Οι μελέτες ακαθαρσιών αποτελούν βασικό τμήμα των πληροφοριών αρχειοθέτησης. Η παροχή πλήρους προφίλ ακαθαρσιών και δεδομένων ελέγχου μειώνει σημαντικά τον κίνδυνο απελευθέρωσης επανεξέτασης.

Περίπτωση 1: φαρμακευτική εταιρεία, πρόγραμμα γενόσημων φαρμάκων τιλπεπτιδίων
Αναπτύσσουν μια γενική έκδοση του τιλπεπτιδίου και χρειάζονται ένα πλήρες σύνολο ελέγχων ακαθαρσιών για την επικύρωση της μεθόδου. Προσαρμόσαμε 12 ακαθαρσίες για αυτούς: 5 πεπτίδια που λείπουν, 2 οξειδωμένες ακαθαρσίες, 1 διμερές, 2 προϊόντα αποβολής λιπαρών οξέων και 2 ακαθαρσίες που σχετίζονται με τον σύνδεσμο-. Καθένα από αυτά έχει καθαρότητα μεγαλύτερη από 95% και συνοδεύεται από δεδομένα MS και NMR. Ο επικεφαλής του έργου είπε, "Οι ακαθαρσίες του τιλπεπτιδίου είναι διπλάσιες από άλλα πεπτίδια, αλλά μπορείτε να τα φτιάξετε όλα και τα δεδομένα είναι πλήρη, κάτι που μας εξοικονομεί πολλή δουλειά." Αργότερα, η επικύρωση της μεθόδου τους ολοκληρώθηκε με επιτυχία και τώρα ετοιμάζονται για τη δήλωση.

Περίπτωση 2: Εταιρεία CRO, προφίλ ακαθαρσιών
Ανέλαβαν ένα ποιοτικό ερευνητικό έργο για το τιλπεπτίδιο, το οποίο απαιτούσε μια ολοκληρωμένη ανάλυση των ακαθαρσιών της διεργασίας. Μας έστειλαν τα ακατέργαστα δείγματα πεπτιδίου και πραγματοποιήσαμε ανάλυση LC-MS, συμπεράνουμε τις πιθανές δομές αρκετών άγνωστων ακαθαρσιών, στη συνέχεια τις συνθέσαμε με στοχευμένο τρόπο και συγκρίναμε τους χρόνους κατακράτησης και τα φάσματα μάζας και επιβεβαιώσαμε τέσσερις νέες ακαθαρσίες - δύο από αυτές σχετίζονταν με συνδέτες{{3} και δύο από αυτές ήταν παραλλαγές οξέων. Ο πελάτης χρησιμοποίησε αυτά τα δεδομένα για να βελτιώσει τα προφίλ ακαθαρσιών και πέρασε με επιτυχία την αποδοχή του πελάτη.

Περίπτωση 3: Μελέτες σταθερότητας, εταιρεία βιοτεχνολογίας
Εξέταζαν τη σταθερότητα ενός σκευάσματος τιλπεπτιδίου και διαπίστωσαν ότι η ποσότητα ενός προϊόντος αποικοδόμησης αυξήθηκε γρήγορα υπό επιταχυνόμενες συνθήκες, αλλά δεν ήξεραν τι ήταν. Αναλύσαμε το δείγμα με LC-MS και υποθέσαμε ότι ήταν μια ακαθαρσία αποαμίδωσης σε μια συγκεκριμένη τοποθεσία Asn και στη συνέχεια το συνθέσαμε με στοχευμένο τρόπο και το επιβεβαιώσαμε συγκριτικά. Καθιέρωσαν μια ανάλυση χρησιμοποιώντας αυτόν τον έλεγχο και παρακολούθησαν με ακρίβεια την τάση του προϊόντος αποδόμησης. Αργότερα, όταν υπέβαλαν την έκθεση, αυτό το μέρος των δεδομένων τονίστηκε από τους ειδικούς και λόγω των στέρεων στοιχείων δεν εκδόθηκε αποζημίωση.

Το Tilpeptide είναι ένα δημοφιλές προϊόν, αλλά η μελέτη ακαθαρσιών είναι μια λεπτή δουλειά, ειδικά προϊόντα απολέπισης με λιπαρά οξέα και ακαθαρσίες που σχετίζονται-με συνδετήρες, τις οποίες πολλοί κατασκευαστές δεν μπορούν να χειριστούν. Εάν κάνετε ποιοτική έρευνα ή γενική ανάπτυξη τιλπεπτιδίου και χρειάζεστε ελέγχους ακαθαρσιών, μη διστάσετε να επικοινωνήσετε μαζί μας. Έχουμε κάνει πολλή δουλειά, ξέρουμε ποιες είναι οι δυσκολίες και ξέρουμε πώς να τα βγάλουμε πέρα.