Δύσκολη & Υδροφοβική Πεπτιδική Σύνθεση

Δύσκολη Πεπτιδική Σύνθεση|Προσαρμογή υδροφοβικών πεπτιδίων|Δύσκολη Πεπτιδική Σύνθεση|Σύνθεση ακολουθίας συστάδων|Επιστήμη-Πεπτίδιο

Η πεπτιδική αλληλουχία είναι πολύ υδρόφοβη; Συγκεντρώνεται εύκολα; Πολλαπλά ζεύγη δισουλφιδικών δεσμών; Science-Οι υπηρεσίες Peptide's Difficult Peptide Synthesis και Hydrophobic Peptide Synthesis ειδικεύονται σε όλα τα είδη "δεν τα καταφέρνω". 20 χρόνια εμπειρίας, ειδικά συστήματα διαλυτών, σταθερή παράδοση. Μη διστάσετε να επικοινωνήσετε μαζί μας.

Τι είδους πεπτίδια θεωρούνται «δύσκολα»;
Έχοντας ασχοληθεί με τη σύνθεση πεπτιδίων για 20 χρόνια, έχω δει όλων των ειδών τα δύσκολα πεπτίδια. Όταν έρχονται πελάτες σε εμάς, έχουν ήδη ρωτήσει αρκετές εταιρείες και η απάντηση που παίρνουν είναι είτε «Δεν μπορώ να το κάνω» ή «Δοκίμασέ το, καμία εγγύηση».

Πεπτίδιο με ισχυρή υδροφοβικότητα: διαμεμβρανική περιοχή, πεπτίδιο σήματος, υδρόφοβο αμινοξύ, όταν συντεθεί, θα συσσωρευτεί πάνω στη ρητίνη και το αμινοξύ πίσω από αυτό δεν θα μπορεί να εισέλθει.
Πεπτίδια που συσσωματώνονται εύκολα, όπως αμυλοειδή και αντιμικροβιακά πεπτίδια, συσσωρεύονται όταν συντίθενται και φράζουν τη στήλη όταν καθαρίζονται.
Πεπτίδια με πολλαπλά ζεύγη δισουλφιδικών δεσμών: περισσότερα από τρία ζεύγη, ένα λάθος βήμα στη σειρά ζευγαρώματος και ολόκληρο το μόριο έχει καταστραφεί.
Μακρύ πεπτίδιο: περισσότερα από 60 αμινοξέα, κάθε βήμα της απόδοσης μειώνεται και στο τέλος δεν μένει τίποτα.
Πολύπλοκος συνδυασμός τροποποιήσεων: φωσφορυλίωση, φθορισμός, κυκλοποίηση και συνθήκες που μάχονται μεταξύ τους.
Μπορούμε να τα πάρουμε όλα, και δεν είναι «προσπαθώ», είναι «έχω σχέδιο».

1. Υδρόφοβα πεπτίδια: με εξειδικευμένα συστήματα διαλυτών
Η δυσκολία των υδρόφοβων πεπτιδίων έγκειται στο γεγονός ότι δεν μπορούν να διαλυθούν σε συμβατικούς διαλύτες και όταν συντίθενται, η πεπτιδική αλυσίδα «συσσωρεύεται» πάνω στη ρητίνη, καθιστώντας αδύνατη την είσοδο των αμινοξέων πίσω από αυτήν.

Η λύση μας:
Ειδικός συνδυασμός διαλυτών: DMF, NMP, μικτό σύστημα DCM, συν λίγο υγρό μέσο απελευθέρωσης, έτσι ώστε η πεπτιδική αλυσίδα να διατηρείται τεντωμένη.
Βελτιστοποίηση θερμοκρασίας: ορισμένες αντιδράσεις είναι καλύτερες στους 40 βαθμούς από τη θερμοκρασία δωματίου, κάποιες πρέπει να χαμηλωθούν στους 0 βαθμούς, τις έχουμε δοκιμάσει μία προς μία.
Επιλογή ρητίνης: Χρησιμοποιήστε ρητίνη υψηλής διαλυτότητας για υδρόφοβα πεπτίδια για να αφήσετε αρκετό χώρο για πεπτιδικές αλυσίδες.
Διαλυτοποιημένες ετικέτες: Εάν δεν μπορείτε, προσθέστε μια υδρόφιλη ετικέτα και κόψτε την μετά τη σύνθεση.

Πραγματική περίπτωση: ένα διαμεμβρανικό πεπτίδιο 35aa, τα υδρόφοβα αμινοξέα αντιπροσώπευαν το 70%, ο πελάτης έψαξε για τρεις εταιρείες δεν μπορεί να γίνει. Αλλάξαμε το σύστημα διαλυτών και προσθέσαμε ετικέτα διαλυτοποίησης, τελικά η καθαρότητα ήταν 92%, και ο πελάτης έκανε τη μελέτη δομής ομαλά.

2. Πολλαπλά ζεύγη δισουλφιδικών δεσμών: καμία τύχη, στρατηγική
Όσο περισσότεροι είναι οι δισουλφιδικοί δεσμοί, τόσο πιο δύσκολο είναι να τα ζευγαρώσετε. Δύο ζευγάρια είναι καλά, αλλά τρία ή περισσότερα ζευγάρια, και ένα λάθος βήμα και όλα τελείωσαν.
Η Στρατηγική μας:
Ορθογώνια προστασία: Το Cys μπορεί να ανοίξει και να συνδυαστεί σε βήματα χρησιμοποιώντας διαφορετικές προστατευτικές ομάδες, όπως Trt, Acm, tBu.
Βελτιστοποίηση συνθηκών οξείδωσης: οξείδωση αέρα, οξείδωση γλουταθειόνης, οξείδωση ιωδίου, διαφορετικές μέθοδοι για διαφορετικά πεπτίδια.
Ενδιάμεσο QC: Μετά από κάθε ζευγάρι, πάρτε ένα δείγμα για MS και επιβεβαιώστε τη σύζευξη πριν προχωρήσετε.
Επιβεβαίωση MS/MS (προαιρετικό): τελική διάσπαση-με δευτερεύουσα φασματομετρία μάζας για να δούμε πού είναι πραγματικά συνδεδεμένοι οι δισουλφιδικοί δεσμοί.

A real case: A conotoxin peptide containing four pairs of disulfide bonds was rejected by many companies. We designed a four-step oxidation strategy, which took six weeks, and delivered >90% καθαρότητα, σωστά ζευγαρωμένοι δισουλφιδικοί δεσμοί και η κρυσταλλική δομή επιλύθηκε στη συνέχεια από τον πελάτη.

3. Συσσωμάτωση-επιρρεπή πεπτίδια: σύνθεση κατά την άμυνα
Ορισμένα πεπτίδια από τη φύση τους αγαπούν να συσσωρεύονται, όπως η αμυλοειδική πρωτεΐνη και το αντιβακτηριακό πεπτίδιο. Αρχίζουν να συσσωματώνονται όταν συντίθενται, μπλοκάρουν τη στήλη όταν καθαρίζονται και δεν μπορούν να διαλυθούν όταν βρίσκονται στο χέρι.
Η λύση μας:
Ψευδοπρολίνη: Η ψευδοπρολίνη εισάγεται στη θέση Ser/Thr για να διαταράξει την τάση συσσωμάτωσης και να αλλάξει ξανά μετά τη σύνθεση.
Τμηματική σύνθεση: Πεπτίδια που είναι πολύ πολυμερισμένα κόβονται σε πολλά τμήματα και συντίθενται χωριστά και στη συνέχεια επανασυνδέονται στο τέλος.
Βελτιστοποίηση των συνθηκών καθαρισμού: υψηλή θερμοκρασία, όξινο pH, προσθήκη οργανικών διαλυτών για την εύρεση συνθηκών που το καθιστούν μη-πολυμεριζόμενο.

4. Σύνθετοι συνδυασμοί τροποποιητών: συνθήκες χωρίς τσακωμούς
Ορισμένα πεπτίδια έχουν πολλαπλές απαιτήσεις: φωσφορυλίωση, φθορίζουσα σήμανση και κυκλοποίηση. Αυτές οι τροποποιήσεις ενδέχεται να έρχονται σε αντίθεση μεταξύ τους - για παράδειγμα, η φωσφορυλίωση είναι όξινη-φοβική, η φθορίζουσα επισήμανση είναι ελαφριά-φοβική και η κυκλοποίηση απαιτεί συγκεκριμένο pH.
Η προσέγγισή μας:
Σχεδιασμός στρατηγικής διατήρησης: ποια περικοπή να γίνει πρώτα, ποια περικοπή να γίνει αργότερα, σχεδιασμένη εκ των προτέρων.
Ορθογώνιες συνθήκες: Οι συνθήκες κάθε σταδίου της αντίδρασης δεν επηρεάζουν τις τροποποιήσεις που έχουν ήδη γίνει.
Ενδιάμεσο QC: Μετά από κάθε βήμα τροποποίησης, πάρτε ένα δείγμα για να βεβαιωθείτε ότι έχει γίνει σωστά πριν προχωρήσετε.

5. Καθαρότητα: Ανάλογα με το τι κάνετε με αυτό

Κάθε πεπτίδιο συνοδεύεται από αναφορά HPLC και MS, καθιστώντας τα δεδομένα καθαρότητας διαφανή.

1. Το κάνουμε αυτό εδώ και 20 χρόνια
Η Δύσκολη Πεπτιδική Σύνθεση δεν είναι κάτι που μπορεί να κάνει ο καθένας. Με τα χρόνια, έχουμε χειριστεί πολλά δύσκολα πεπτίδια: διαμεμβρανικές πρωτεΐνες, πεπτίδια σύντηξης ιών, κωνοτοξίνες, αμυλοειδείς πρωτεΐνες, αντιμικροβιακά πεπτίδια κ.λπ. Έχουμε μια καλή ιδέα για το ποιες αλληλουχίες είναι επιρρεπείς σε προβλήματα και ποιες συνθήκες μπορούν να τις σώσουν. Τουλάχιστον δεν χρειάζεται να δοκιμάσετε κάθε ένα από αυτά αν έρθετε σε εμάς για δύσκολη και υδροφοβική σύνθεση πεπτιδίων.

2. Δεν είναι «δοκιμάζω», είναι «έχω πρόγραμμα».
Πολλές εταιρείες αναλαμβάνουν δύσκολα πεπτίδια και λένε, "Θα το δοκιμάσουμε, αλλά δεν το εγγυόμαστε". Δεν παίζουμε έτσι. Πριν αποδεχθούμε μια παραγγελία, θα αξιολογήσουμε την αλληλουχία, ποια είναι η αναλογία των υδρόφοβων αμινοξέων, εάν υπάρχει κάποια γνωστή τάση συσσωμάτωσης, πόσα ζεύγη δισουλφιδικών δεσμών και αν η τροποποίηση είναι πολύπλοκη ή όχι. Μετά την αξιολόγηση, θα σας πούμε: ποιο είναι το ποσοστό επιτυχίας και πόσος είναι ο χρόνος του κύκλου.

Δεν δεχόμαστε εντολές που δεν μπορούν να γίνουν και πρέπει να παραδώσουμε εντολές που έχουμε λάβει.

3. Εξειδικευμένα συστήματα διαλυτών για υδροφοβικότητα
Το υδρόφοβο πεπτίδιο είναι το δυνατό μας σημείο. Εάν ο συμβατικός διαλύτης δεν μπορεί να διαλυθεί, θα αλλάξουμε τον διαλύτη. Εάν η συμβατική θερμοκρασία δεν αντιδράσει, θα προσαρμόσουμε τη θερμοκρασία. αν η συμβατική ρητίνη δεν αντέχει, θα αλλάξουμε τη ρητίνη. Υπάρχει επίσης η διαλυτοποιητική ετικέτα ως οπισθοδρόμηση.

4. Πολλαπλά ζεύγη δισουλφιδικών δεσμών, βήμα-βήμα-
Εάν υπάρχουν περισσότερα από τρία ζεύγη δισουλφιδικών δεσμών, θα ακολουθήσουμε μια προσέγγιση-προς-βήμα: το πρώτο βήμα είναι να προστατεύσουμε τον Α και να ανοίξουμε το πρώτο ζεύγος. Προστατέψτε το Β και ανοίξτε το δεύτερο ζεύγος. προστατέψτε το C και ανοίξτε το τρίτο ζεύγος. Μετά από κάθε βήμα, παίρνουμε δείγματα για MS και επιβεβαιώνουμε τη σύζευξη πριν προχωρήσουμε. Τέλος, το MS/MS θα σπάσει και θα επαληθευτεί και τα δεδομένα θα σας δοθούν χωρίς να το μαντέψετε.

5. Ποιοτικός έλεγχος: δεδομένα σε κάθε βήμα
Ο ποιοτικός έλεγχος των δύσκολων πεπτιδίων πρέπει να είναι πιο προσεκτικός:
Ενδιάμεσο QC: Μετά από κάθε θραύσμα και κάθε βήμα τροποποίησης, μετρήστε πρώτα την καθαρότητα και το μοριακό βάρος.
Τελικό προϊόν: HPLC για καθαρότητα, MS για μοριακό βάρος.
Δοκιμή διαλυτότητας: Παρέχετε συνιστώμενους διαλύτες και μεθόδους διαλυτοποίησης, ώστε να μην λαμβάνετε πεπτίδια που δεν διαλύονται.
Κάνοντας δύσκολη και Υδροφοβική Πεπτιδική Σύνθεση, τα δεδομένα μιλούν από μόνα τους, κάθε βήμα μπορεί να εντοπιστεί.

• Μορφή χορήγησης: λυοφιλοποιημένη σκόνη, σωλήνες φυγοκέντρησης ή φιαλίδια.
• Συνοδευτικά έγγραφα: COA (προφίλ HPLC + φάσμα MS), αναφορά σύνθεσης (προαιρετικό).
• Προαιρετικές δοκιμές: περιεκτικότητα σε πεπτίδια, ενδοτοξίνη, υγρασία, σύνθεση αμινοξέων, δοκιμή διαλυτότητας.
• Προσαρμοσμένη συσκευασία: μερίδα και σήμανση σύμφωνα με τις απαιτήσεις σας.
• Κάθε δύσκολο και υδρόφοβο προϊόν σύνθεσης πεπτιδίων ελέγχεται για να διασφαλιστεί ότι η αλληλουχία είναι σωστή και η καθαρότητα είναι στα πρότυπα προτού αποσταλεί.

Είτε έχετε απορριφθεί από άλλους είτε δεν μπορείτε να το κάνετε στο δικό σας εργαστήριο, μπορείτε να μιλήσετε μαζί μας. Αν ψάχνετε για Επιστήμη-Πεπτίδιο για να κάνετε δύσκολη και υδροφοβική σύνθεση πεπτιδίων, τουλάχιστον δεν χρειάζεται να δοκιμάσετε ένα προς ένα.

Θέλω να μου πεις:
Πεπτιδική αλληλουχία (ή πληροφορίες στόχου)
Είχες κάνει κάποιον άλλο πριν; Ποιο είναι το αποτέλεσμα;
Πόσο (χιλιοστόγραμμα)
απαιτήσεις καθαρότητας

Πότε το θέλεις;

Σας δίνουμε μια αξιολόγηση σκοπιμότητας και μια προσφορά προγράμματος εντός 24 ωρών.